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Tecniche di laboratorio nella diagnostica delle emopatie Vol I

Cuneo,Castoldi, Rigolin

Piccin Novembre 2011,

450 pagg.

isbn:9788829920549

disponibile dal 30 novembre 2011

 

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Piccin Novembre 2011


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TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA DI LABORATORIO
Fondato da ANGELO BURLINA
Volume V/1
TECNICHE DI LABORATORIO
NELLA DIAGNOSTICA
DELLE EMOPATIE
Seconda edizione a cura di
ANTONIO CUNEO, GIANLUIGI CASTOLDI
e GIAN MATTEO RIGOLIN
Alescio/Buonomini/Dori – Biologia dinamica
Amadori – Ematologia
Arienti – Le basi molecolari della nutrizione
Arienti – Un compendio di biochimica per le lauree triennali
Bauer et al. – Analisi strumentale
Bergmeyer – Principi di analisi enzimatica
Betterle – Le malattie autoimmuni
Betterle – Gli autoanticorpi
Boari – Emocromo: guida rapida all’interpretazione ragionata
Bolognani/Volpi – Tavole metaboliche
Bozzetti – Idee direttive in medicina di laboratorio
Cabras/Martelli – Chimica e tecnologia degli alimenti
Cao/Dallapiccola/Notarangelo – Malattie genetiche.
Molecole e geni
Cevenini – Microbiologia clinica
Cevenini/Sambri – Microbiologia e Microbiologia clinica
per le lauree triennali
Cifuentes Delatte – Il laboratorio dell’urologo
Cooper/Hausman – La cellula: un approccio molecolare
Crepaldi – Trattato di medicina interna
d’Ischia – La chimica organica in laboratorio
De la Maza/Pezzlo/Shigei/Peterson - Atlante a colori di batteriologia
medica
Dizionario Medico Enciclopedico
Duarte – Tests di funzionalità renale
Duranti/Pagani – Enzimologia
Fontana/Cornaglia – L’antibiogramma
Fradà – Semeiotica medica
Galli/Corsini/Marinovich – Tossicologia
Galzigna – Principi di enzimologia
Galzigna – Introduzione alla biochimica patologica
Ganong – Fisiologia medica
Garrett – Principi di biochimica
Giannetti – Trattato di Dermatologia
Gombos – Immunopatologia orale
Greenspan/Forsham – Endocrinologia clinica
Gulletta/Bertiato – Le biotecnologie in microbiologia diagnostica/
Le infezioni trasmesse da zecche
Hage/Carr - Chimica analitica ed analisi quantitativa
Ishikawa/Kawai/Miyai – Dosaggi immunoenzimatici
Laposata – Medicina di laboratorio
Lewis – Genetica umana
Janeway/Travers/Walport/Shlomchik – Immunobiologia
Jawetz/Melnick/Adelberg – Microbiologia medica
Mader – Biologia: l’essenziale
Mandell – Atlante basilare delle malattie infettive
Mandell/Diamond – Atlante delle infezioni fungine
Mariuzzi – Anatomia patologica e correlazioni anatomo-cliniche
Mazzi – Tecniche istologiche e istochimiche
McCann/Foà/Smith/Conneally – Casi clinici di ematologia
McMurry – Chimica organica
Meduri/Notario – Testo-Guida alla Diagnostica clinica
interattiva su CD-Rom
Mentasti/Saini – Analisi chimica cromatografica
Milanesi/Tani/Ciapini – Immunofissazione nella diagnostica
di laboratorio
Milanesi/Tani/Ciapini/Spandrio – Principi e metodi di indagine
immunoelettroforetica delle proteine urinarie
Monesi – Istologia
Pearse – Istochimica
Petrucci – Chimica generale
Pier/Lyczak/Wetzler – Immunologia, infezione, immunità
Pizzoferrato – Ormoni e dosaggi ormonali
Pontieri – Patologia generale
Quaglino/Cavallo/Forni – Le difese immunitarie
Ravetto/Boccato – Atlante di citodiagnostica per aspirazione
con ago sottile
Regueiro – Immunologia
Rizzotti/Pradella – I reticolociti
Rhoades/Pflanzer – Fisiologia generale e umana
Samaja – Biochimica per le lauree sanitarie
Siliprandi/Tettamanti – Biochimica medica
Spandrio – Principi e tecniche di chimica clinica
Spandrio – Manuale di laboratorio
Tietz – Guida clinica alle analisi di laboratorio
Tozzoli/Bizzaro – La diagnostica di laboratorio nelle malattie
autoimmuni sistemiche
Vaira/Menegatti/Miglioli – Testo-Atlante a colori di diagnostica
di laboratorio dell’infezione da Helicobacter Pylori
Vaira/Menegatti/Miglioli – Testo-Atlante a colori di patologia
da Helicobacter Pylori
Verna – Diagnostica di laboratorio con i metodi della biologia
molecolare
Ziegler – Nutrizione
TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA
DI LABORATORIO
Fondato da A. Burlina
Vol. I: Galzigna/Plebani – Biochimica clinica generale
(N. Ed.)
Vol. II: Spandrio – Biochimica clinica speciale (N. Ed.)
Vol. III: Eyquem – Microbiologia clinica (aggiornato)
Vol. IV: Dammacco – Immunologia clinica (N. Ed.)
Vol. V: Cuneo/Castoldi/Rigolin/D’Onofrio/Zini –
Diagnostica ematologica (N. Ed.)
Vol. VI: Di Minno/Reali – Emocoagulazione ed emostasi –
Immunoematologia e trasfusione (N. Ed.)
Vol. VII: Panteghini – Interpretazione degli esami di laboratorio
(N. Ed.)
Vol. VIII: Boccato – Citopatologia diagnostica (N. Ed.)
Vol. IX: Balestrieri/D’Amora/Giordano/Napoli/Pavan –
Diagnostica molecolare nella medicina di laboratorio (N.
Ed.)
TRATTATO DI MEDICINA INTERNA
Fondato da P. Larizza
Vol. I: Tomo I – Generalità – Malattie del sangue
e degli organi emopoietici
Vol. I: Tomo II – Malattie del sangue, degli organi
emopoietici e della milza – Coagulopatie –
Immunologia clinica
Vol. II: Malattie infettive
Vol. III: Malattie delle ghiandole endocrine, del metabolismo
e della nutrizione
Vol. IV: Malattie osteoarticolari e del connettivo –
Malattie da agenti fisici, chimici e ambientali
Vol. V: Malattie dell’apparato respiratorio
Vol. VI: Malattie del cuore e dei vasi
Vol. VII: Malattie del rene, delle vie urinarie e dell’apparato
genitale maschile
Vol. VIII: Malattie del canale digerente
Vol. IX: Malattie del fegato, delle vie biliari e del pancreas
Vol. X: Malattie del sistema nervoso
Dello stesso Editore
TRATTATO ITALIANO DI MEDICINA DI LABORATORIO
Fondato da ANGELO BURLINA
Volume V/1
TECNICHE DI LABORATORIO
NELLA DIAGNOSTICA
DELLE EMOPATIE
Seconda edizione a cura di
GIANLUIGI CASTOLDI
Professore Ordinario di Ematologia
Dipartimento di Scienze Biomediche
e Terapie Avanzate
Azienda Ospedaliero Universitaria
Arcispedale S. Anna - Ferrara
GIAN MATTEO RIGOLIN
Ricercatore Universitario di Ematologia
Dipartimento di Scienze Biomediche
e Terapie Avanzate
Azienda Ospedaliero Universitaria
Arcispedale S. Anna - Ferrara
ANTONIO CUNEO
Professore Ordinario di Ematologia
Dipartimento di Scienze Biomediche
e Terapie Avanzate
Azienda Ospedaliero Universitaria
Arcispedale S. Anna - Ferrara
Tutti i diritti sono riservati
È VIETATA PER LEGGE LA RIPRODUZIONE IN FOTOCOPIA
E IN QUALSIASI ALTRA FORMA
È vietato riprodurre, archiviare in un sistema di riproduzione
o trasmettere sotto qualsiasi forma o con qualsiasi mezzo elettronico,
meccanico, per fotocopia, registrazione o altro,
qualsiasi parte di questa pubblicazione senza autorizzazione scritta dell’Editore.
Ogni violazione sarà perseguita secondo le leggi civili e penali.
ISBN 978-88-299-2054-9
Stampato in Italia
© 2012, by Piccin Nuova Libraria S.p.A. - Padova
www.piccin.it
Dopo la stesura della 1a edizione del V volume della
Collana di Medicina di Laboratorio fondata da
Angelo Burlina a cura di G.L. Castoldi e D. Quaglino
e dedicata alle tecniche laboratoristiche in campo ematologico,
è parso opportuno, nella nuova edizione a distanza
di circa 10 anni, introdurre nuovi capitoli o aggiornarne
alcuni di base.
Ne sono scaturiti due volumi (l’uno a cura di
Cuneo, Castoldi e Rigolin, dedicato alla diagnostica
del midollo osseo, l’altro a cura di D’Onofrio, Zini e
Rigolin, dedicato allo studio del sangue periferico),
pressoché totalmente rinnovati e comprendenti numerose
nuove tecniche di laboratorio applicate alla diagnostica
delle emopatie anche in accordo con i criteri
delle recenti classificazioni internazionali.
Ci riferiamo in particolare, per quanto riguarda il I
volume, alla citogenetica molecolare di numerose
emopatie sistemiche, ai principali aspetti istopatologici,
corredati dall’uso di anticorpi monoclonali, alla applicazione
di microarrays o alle tecniche di valutazione
dei riarrangiamenti delle Immunoglobuline, ai vari
aspetti del processo infiammatorio, ai nuovi concetti
sui quadri iporigenerativi ed in particolare sulla anemia
aplastica.
Questi capitoli completamente nuovi sono frutto
della esperienza maturata lungo diversi anni da ricercatori
che hanno acquisito prestigio e rilevanza nei singoli
campi, anche con prolungati soggiorni presso istituzioni
estere.
L’aspetto più significativo di questo volume riguarda
la diagnostica integrata delle singole emopatie che,
partendo dai classici aspetti morfologici, introduce
progressivamente aspetti di citochimica, cromosomici,
molecolari, del fenotipo e della microscopia elettronica.
Sebbene non tutte queste metodiche siano di immediata
applicabilità, tuttavia l’analisi in sequenza delle
stesse consente una valorizzazione di numerosi dettagli
utili alla diagnosi.
Sono stati mantenuti ovviamente alcuni capitoli
quali quello dedicato all’agoaspirato midollare ed alla
biopsia midollare o alla composizione classica del midollo
osseo, anche se opportunamente aggiornati,
mentre la gran parte dei capitoli è di nuova introduzione
in rapporto alle mutate esigenze diagnostiche maturate
negli ultimi anni. A questo riguardo si è fatto ricorso
a numerose nuove figure e schemi interpretativi
che integrano il testo in modo da dare al lettore una
immediata comprensione degli argomenti.
Non va dimenticata da ultimo la particolare dedizione
della casa editrice Piccin alla composizione di
questo volume che non ha risparmiato energie nella risoluzione
di numerosi problemi legati alla stampa di
un volume così complesso.
A. Cuneo
G.L.Castoldi
G.M. Rigolin
PREFAZIONE

Dott. Andrea Bacigalupo
Reparto di Ematologia
Ospedale San Martino - Genova
Dott. Maurizio Bergami
Dirigente I Livello U.O. di Nefrologia
Arcispedale S. Anna di Ferrara
Prof. Gianluigi Castoldi
già Direttore Cattedra Ematologia
Dipartimento Scienze Biomediche e Terapie Avanzate
Sezione di Ematologia e Fisiopatologia dell’Emostasi
Università degli Studi di Ferrara
Dott. Luigi Catizone
Direttore U.O. di Nefrologia
Arcispedale S. Anna di Ferrara
Dott. Francesco Cavazzini
Ricercatore
Sezione Ematologia
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Prof. Luigi Cavazzini
P.O. Anatomia Patologica
Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica
Sezione di Anatomia, Istologia e Citologia Patologica
Università degli Studi di Ferrara
Dott.ssa Maria Ciccone
Assegnista di Ricerca
Sezione di Ematologia
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Prof. Antonio Cuneo
P.O. Ematologia
Direttore Sezione di Ematologia
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Dott.ssa Melissa Dabusti
Contrattista
Sezione di Ematologia
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Prof. Francesco Di Virgilio
P.O. Patologia Clinica
Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica
Sezione di Paologia Generale
Università degli Studi di Ferrara
Prof. Giuseppe D’Onofrio
P.A. Patologia Clinica
Università Cattolica del Sacro Cuore di Roma
Prof. Vincenzo Liso
Presidente C.d.L. in Medicina e Chirurgia
P.O. Ematologia
Dipartimento di Anatomia Patologica
Università degli Studi di Bari
Cattedra e Servizio di Ematologia
Azienda Policlinico di Bari
Prof. Shaun Mc Cann
P.E. di Ematologia, FRCPath, FRCPI
Haematology Department
Trinity College University di Dublino
Dott. Massimo Negrini
Ricercatore
Dipartimento di Medicina Sperimentale e Diagnostica
Università degli Studi di Ferrara
Dott. Andrea Piccin
Specialista in Ematologia, MD, PhD
Reparto di Ematologia e Centro Trapianti di Midollo
Osseo
Ospedale S. Maurizio di Bolzano
Dott. Giorgio Ricci
Ricercatore
Segretario UNIGASTRO
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Prof. Franco Rigolin
già Direttore del Laboratorio di Analisi
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
AUTORI
VIII Vol. V/1
Dott. Gian Matteo Rigolin
Ricercatore
Dipartimento Scienze Biomediche e Terapie Avanzate
Sezione di Ematologia e Fisiopatologia dell’Emostasi
Università degli Studi di Ferrara
Dott.ssa Gloria Russo
Dirigente I Livello U.O. di Nefrologia
Arcispedale S. Anna di Ferrara
Prof.ssa Giorgina Specchia
P.O. Ematologia
Cattedra e Servizio di Ematologia
Azienda Policlinico Bari
Università degli Studi di Bari
Dott. Paolo Tomasi
Dirigente I Livello
Sezione Ematologia
Arcispedale S. Anna
Università degli Studi di Ferrara
Prof.ssa Gina Zini
P.A. Patologia Clinica
Università Cattolica del Sacro Cuore di Roma
AUTORI
PARTE PRIMA
L’esame del midollo osseo. Tecniche di laboratorio
1. Metodi di prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
G.M. Rigolin, R. Spanedda, G.L. Castoldi
Agoaspirato midollare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Indicazioni all’agobiopsia midollare . . . . . . . . . . .3
Tecnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Strumentazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3
Sede del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
Modalità del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
Esame dell’aspirato midollare . . . . . . . . . . . . . . . .6
Biopsia ossea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8
Tecnica del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8
Sede del prelievo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8
Strumentazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8
Procedimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9
Preparazione delle sezioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9
Esame della biopsia ossea . . . . . . . . . . . . . . . . . .11
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .12
2. Composizione cellulare del midollo osseo . . . .13
G.L. Castoldi, V. Liso, G.M. Rigolin
Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13
Compartimento stromale midollare (microambiente
osteo-midollare) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Compartimento emopoietico . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Serie eritroide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
Proeritroblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
Eritroblasto basofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Eritroblasto policromatofilo . . . . . . . . . . . . . .18
Eritroblasto ortocromatico . . . . . . . . . . . . . . . .18
Reticolocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Eritrocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Serie granulocitaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Mieloblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Promielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Mielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Metamielocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Granulocito neutrofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23
Principali anomalie morfologiche dei granulociti
neutrofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23
Serie eosinofila . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Promielocito eosinofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Mielocito e metamielocito eosinofilo . . . . . . . .24
Eosinofilo maturo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Serie basofila e mastcellule . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Promielocito, mielocito e metamielocito
basofilo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Polimorfonucleato basofilo . . . . . . . . . . . . . . . .25
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Mastcellule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Serie monocito-macrofagica . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Monoblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Promonocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Monocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26
Macrofago e cellula di Langerhans . . . . . . . . .26
Serie megacariocitaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
Megacarioblasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
Promegacariocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Megacariocito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Piastrine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Serie linfoide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Linfociti B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Linfociti T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
Terza popolazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
Microscopia ottica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Plasmacellula . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Microscopia ottica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . .32
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Cellule non emopoietiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Osteoblasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Adipociti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Osteoclasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Strutture vascolari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
INDICE GENERALE
X Vol. V/1
3. Tecniche d’indagine del midollo osseo . . . . .35
A. Tecniche citochimiche . . . . . . . . . . . . . . . . . .35
P. Tomasi
Mieloperossidasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35
Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36
Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36
Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36
Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Esterasi leucocitarie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
α-Naftil acetato esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38
Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38
Naftol ASD-acetato: metodo con il fast blue bb .39
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39
α-Naftil-acetato esterasi acida: metodo con
la pararosanilina esazotizzata . . . . . . . . . . . . . . . .40
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
α-Naftil-butirrato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Naftol AS-D cloroacetato esterasi (chlor e) . . . . .40
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40
Metodo con il Fast Garnet per strisci e sezioni . .41
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Colorazione con il Sudan black B . . . . . . . . . . . .41
Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Sudan Nero B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42
Metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42
Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42
Colorazione con l’Acido Periodico Schiff (PAS) 42
Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Tecnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43
Fosfatasi Alcalina Leucocitaria . . . . . . . . . . . . . .44
Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
Preparazione delle soluzioni . . . . . . . . . . . . . . .44
Soluzioni tampone . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44
Calcolo dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45
Commenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45
Metodo del Colorante Azoico; Naftol AS-MX
Fosfato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45
Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45
Preparazione delle soluzioni . . . . . . . . . . . . . . .45
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Risultati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Calcolo del punteggio ed interpretazione . . . . .46
Commenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Fosfatasi acida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Fast Garnet GBC Method . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Fast Red ITR method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Reattivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Metodo con la Pararosanilina . . . . . . . . . . . . . . . .48
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Interpretazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Quadri interpretativi delle principali rezioni
citochimiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
Reazione al Blue di Prussia . . . . . . . . . . . . . . . . .49
Finalità del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49
Principio del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Interpretazione dei risultati . . . . . . . . . . . . . . . .50
Blue di Toluidina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Finalità del test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Principio del metodo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Metacromasia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Procedura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50
Risultato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .51
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .51
B. Tecniche immunocitochimiche ed immunoistochimiche
in ematologia. L’immunoperossidasi
e l’immunofosfatasi alcalina . . . . . . . . . . . . . .53
P. Tomasi
Trattamenti dei campioni citologici . . . . . . . . . . .53
Fase di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53
Metodi con coniugati anticorpo-enzima . . . . . .54
Metodi indiretti con complessi immuni
anticorpo-enzima . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54
Metodi indiretti con coniugati non anticorpali . . .55
Sistema con complessi avidina-enzima . . . . . .55
Sistemi con complessi ABC . . . . . . . . . . . . . . .55
Doppia colorazione immunoenzimatica . . . . . . . .55
Sviluppo della reazione colorimetrica . . . . . . . . .56
Rivelazione della perossidasi . . . . . . . . . . . . . .56
Rivelazione della fosfatasi alcalina . . . . . . . . .56
Colorazione immunoenzimatica degli strisci e
delle sezioni istologiche secondo la procedura
APAAP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56
Preparazione degli strisci cellulari . . . . . . . . . .56
Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57
Preparazione delle sezioni tissutali . . . . . . . . . .57
Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57
Colorazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57
Reagenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58
INDICE GENERALE
Vol. V/1 XI
C. Allestimento di campioni cellulari per
l’osservazione in microscopia elettronica
a trasmissione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59
P. Tomasi
Fissazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59
Post-fissazione, deidratazione, impregnazione,
inclusione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .60
Metodi di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .60
Sezione e colorazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Contrasto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Citochimica ultrastrutturale . . . . . . . . . . . . . . . . .61
Fosfatasi acida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62
Esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62
Metodo dell’azo-indoxyl per la dimostrazione
dell’esterasi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62
Alpha naphtyl acetate esterase (ANAE) . . . . . .62
Citocromo ossidasi (con il metodo DAB) . . . .63
Perossidasi endogene . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .63
5’-nucleotidasi (Naidoo e Pratt-1954,
Uusitalo-1981) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .64
Immunoelettronmicroscopia . . . . . . . . . . . . . . . . .64
D. Metodiche di pre-embedding su cellule isolate.
Marcatura di antigeni di superficie su cellule
isolate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .66
P. Tomasi
Metodica di singola marcatura con perossidasi . .66
Metodica di singola marcatura con particelle di
oro colloidale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .66
Metodica di doppia marcatura con particelle di
oro colloidale di diametro diverso (metodo indiretto
e metodo diretto) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67
Metodica di doppia marcatura oro colloidaleperossidasi
(due metodi indiretti anticorpi della
stessa specie ma di classe diversa) . . . . . . . . . . . .67
Metodica di doppia marcatura con particelle di
oro colloidale di diverso diametro (metodo indiretto
e metodo streptavidina-biotina) . . . . . . . .67
Tecnica di immunomarcatura in post embedding 68
Immunocitochimica immunostrutturale . . . . . . . .68
Immuno-tem-mieloperossidasi (MPPO) . . . . . . .68
Microscopia a scansione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69
Tecniche di preparazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69
Immunoelettronmicroscopia a scansione . . . . . . .70
Immunocitochimica a scansione . . . . . . . . . . . . .71
Procedura per il rilievo della fosfatasi acida . .71
Procedura per il rilievo della mieloperossidasi 71
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .71
E. Biopsia osteomidollare . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
L. Cavazzini
Processazione e colorazione della biopsia
osteomidollare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73
Adeguatezza della biopsia osteo-midollare . . . . .75
Cellularità e popolazioni emopoietiche . . . . . . . .78
Alterazioni di significato patologico . . . . . . . . . .87
Esame della biopsia osteomidollare . . . . . . . . . .102
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .105
F. Diagnostica molecolare . . . . . . . . . . . . . . . .106
M. Negrini
Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106
Metodiche molecolari nella diagnosi di leucemie
e linfomi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106
Southern Blot . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .106
Reazione polimerasica a catena (PCR) . . . . . .107
Nested PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .109
Analisi dei frammenti . . . . . . . . . . . . . . . . . . .109
Analisi del chimerismo con microsatelliti . . .110
PCR real time . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .110
Analisi di sequenza . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .110
Screening di mutazioni . . . . . . . . . . . . . . . . . .110
Uso delle tecniche molecolari in diagnostica
e nel follow-up . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .111
Tecniche molecolari in diagnostica . . . . . . . . .111
Controlli di remissione con diverse tecniche
PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .113
Campionamento del materiale . . . . . . . . . . . .113
Diagnostica molecolare nella leucemia mieloide
acuta (AML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114
Rilevazione di geni di fusione . . . . . . . . . . . .114
Mutazioni molecolari nella leucemia mieloide
acuta (AML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114
Controlli di remissione della AML . . . . . . . . .115
Diagnostica molecolare nella sindrome
mielodisplastica (MDS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . .115
Rilevazione di delezioni nella MDS . . . . . . . .115
Rilevazione di geni di fusione nella MDS . . .116
Marcatori di follow up della MDS . . . . . . . . .116
Diagnostica molecolare nella leucemia mieloide
cronica (CML) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .116
Resistenza all’Imatinib nelle leucemie
positive a BCR-ABL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .117
Controlli di follow-up nella CML . . . . . . . . .117
Altre patologie mieloproliferative . . . . . . . . .117
Diagnostica molecolare nella leucemia linfatica
acuta (LLA) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .117
Diagnostica molecolare della LLA . . . . . . . . .117
Mutazioni molecolari nella LLA . . . . . . . . . .118
Controlli di follow-up nella LLA . . . . . . . . . .118
Diagnostica molecolare nella leucemia
linfatica cronica (LLC) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .119
Delezioni cromosomiche nella LLC . . . . . . . .119
Riarrangiamento di geni nella LLC . . . . . . . .119
Iper-mutazione dei geni VH nella LLC . . . . .119
Leucemia a cellule pelose (HCL) . . . . . . . . . .119
Diagnostica molecolare nei linfomi . . . . . . . . . .119
Linfoma mantellare (MCL) . . . . . . . . . . . . . .119
Linfoma follicolare (FL) . . . . . . . . . . . . . . . . .119
Linfoma MALT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .120
Linfoma linfoplasmocitico/immunocitoma
(LPL) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .120
Linfoma di Burkitt (BL) . . . . . . . . . . . . . . . . .120
Mieloma multiplo (MM) . . . . . . . . . . . . . . . . . .120
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .121
INDICE GENERALE
XII Vol. V/1
G. Impiego di microarray per l’analisi
dell’espressione genica . . . . . . . . . . . . . . . . .123
M. Negrini
Caratteristiche principali nella tecnologia microarray 123
Tipologie di Array . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .123
Caratteristiche delle sonde . . . . . . . . . . . . . . . . .123
Marcatura degli acidi nucleici . . . . . . . . . . . . . .124
Protocollo per analisi dell’espressione di mRNA .125
Marcatura a cRNA diretta - Un colore (Cy3) -
Oligonucleotide High density microarray . . . . .125
Sintesi del cDNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .126
Amplificazione a cRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . .126
Purificazione del cRNA marcato . . . . . . . . . . . .127
Quantificazione del cRNA marcato . . . . . . . . . .127
Frammentazione del cRNA . . . . . . . . . . . . . . . .127
Ibridizzazione e lavaggi . . . . . . . . . . . . . . . . . . .128
Acquisizione immagine ibridazione mediante
scanner confocale a fluorescenza . . . . . . . . . . . .128
Protocollo per l’analisi dell’espressione
di microRNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .128
Marcatura del campione di RNA . . . . . . . . . . . .130
Defosforilazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .130
Ligazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .130
Purificazione e concentrazione del marcato . . . .130
Ibridazione, lavaggi e acquisizione dell’immagine 130
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .131
H. Analisi del riarrangiamento clonale VDJ e
mutazioni somatiche della regione IGVH
nella leucemia linfatica cromatica . . . . . . . .132
M. Negrini
Diversità Anticorpale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .133
Analisi della clonalità dei linfociti B . . . . . . . . .134
Procedura sperimentale basata su PCR per
l’analisi della regione VDJ in campioni LLC . .135
PARTE SECONDA
Diagnosi integrata nelle principali emopatie
1. Anemie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Definizione e classificazione . . . . . . . . . . . . . . .143
Anemia aplastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .143
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145
Anemia delle malattie croniche . . . . . . . . . . . . .146
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Anemie diseritropoietiche (CDA) . . . . . . . . . . .146
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
CDA I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .147
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .147
CDA II (HEMPAS) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .148
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
CDA III . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .148
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Altri tipi di CDA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Anemia megaloblastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .149
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .150
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .150
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .152
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152
Anemia sideropenica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .152
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .154
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Talassemia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Genetica molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .156
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .156
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .157
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157
Anemia drepanocitica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158
Sferocitosi ereditaria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159
Fisiopatologia della sferocitosi . . . . . . . . . . . .160
Ellissocitosi ereditaria comune . . . . . . . . . . . . . .160
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160
Piropoichilocitosi ereditaria . . . . . . . . . . . . . . . .160
Ellissocitosi sferocitica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160
INDICE GENERALE
Vol. V/1 XIII
Ovalocitosi del Sud-Est Asiatico . . . . . . . . . . . .160
Anemie emolitiche da difetto enzimatico . . . . .161
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161
Anemia emolitica da carenza di glucoso-6-fosfato
deidrogenasi (Shunt dei pentoso-fosfati) . . . . . .161
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161
Anemia emolitica da carenza di piruvato chinasi
(glicolisi anaerobia) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Emoglobinuria parossistica notturna (EPN) . . . .162
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .162
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163
Anemia mieloftisica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .164
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .164
2. Neoplasie mieloproliferative . . . . . . . . . . . .165
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Leucemia mieloide cronica (LMC) . . . . . . . . . .165
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Fase florida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .165
Fase accelerata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166
Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166
Criteri WHO per la definizione di LMC in
fase accelerata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166
Crisi blastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167
Midollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .167
Criteri WHO per la definizione di LMC in
fase blastica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .168
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .168
Mutazioni di bcr-abl . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172
Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172
Disordini eosinofili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .172
Leucemia cronica eosinofila . . . . . . . . . . . . . .172
Sindrome ipereosinofila idiopatica (HES) . . .173
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .174
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .174
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . .175
Alterazioni citogenetiche e Biologia
molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175
Policitemia vera (PV) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177
Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .178
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Criteri WHO per la diagnosi di PV . . . . . . . .180
Criteri maggiori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Criteri minori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Trombocitemia essenziale . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .180
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181
Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181
Criteri WHO per la diagnosi di TE . . . . . . .182
Mielofibrosi idiopatica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183
Biologia molecolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184
Criteri WHO per la diagnosi di MI . . . . . . .184
Criteri maggiori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184
Criteri minori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184
3. Neoplasie mielodisplastiche/
mieloproliferative . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .185
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .185
Leucemia mielomonocitica cronica (CMML) . .185
RARS-T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .186
4. Sindromi mielodisplastiche (MDS) . . . . . .187
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .187
Diagnosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .188
Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .188
Blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .190
Sideroblasti ad anello . . . . . . . . . . . . . . . . . . .191
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .191
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .193
Sindrome 5q- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193
SMD e prognosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .198
INDICE GENERALE
5. Leucemie acute mieloidi (LAM) . . . . . . . . .199
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Proposte della WHO per la classificazione
delle LAM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .199
Diagnosi di LAM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200
Campioni richiesti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200
Valutazione dei blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . .200
Valutazione della filiera di appartenenza
dei blasti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .201
Valutazione delle caratteristiche genetiche . . .201
Refertazione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .201
LAM con anomalie citogenetiche ricorrenti . . .201
LAM con minima differenziazione (corrisponde
a M0 FAB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .202
Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .202
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .202
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .202
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .203
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .203
LAM senza maturazione (corrisponde a M1 FAB) 204
Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .204
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .204
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .205
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .205
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .205
LAM con maturazione (corrisponde a M2 FAB) .206
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .206
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .206
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .206
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .206
LAM con t(8;21)(q22;q22); RUNX1-
RUNX1T1 (AML1-ETO) . . . . . . . . . . . . . . . .206
LAM con basofilia (corrisponde a M2 baso FAB) .207
Sangue periferico e midollo osseo . . . . . . . . .207
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .211
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . . .211
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .211
Leucemia acuta promielocitica (LAP)
(corrisponde a M3) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .214
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .214
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .214
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .216
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .217
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .217
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .217
Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .218
Leucemia acuta a cellule mieloidi/Natural killer . .218
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .218
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .219
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .219
Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .219
LAM mielomonocitica (corrisponde a M4 FAB)219
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .219
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .222
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222
Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224
LAM mielomonocitica con eosinofilia
(corrisponde a M4 Eos FAB) . . . . . . . . . . . . . . .224
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .224
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224
Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .224
LAM monocitica/monoblastica (M5) . . . . . . . . .225
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .225
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .226
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .226
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227
Forme varianti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227
Test biochimici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227
LAM monoblastica con eritrofagocitosi . . . . . .228
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .228
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .228
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .233
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233
Leucemia acuta eritroide (corrisponde a
M6 AFB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .233
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .234
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .234
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236
Leucemia acuta megacarioblastica (corrisponde
a M7 FAB) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .236
Sangue periferico e midollo . . . . . . . . . . . . . .236
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .238
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .239
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .239
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .239
LAM con alterazioni di tipo mielodisplastico . .240
Neoplasie mieloidi correlate a terapie . . . . . . . .244
Leucemie bifenotipiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . .244
Leucemie bilineari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .245
Leucemia di origine ambigua e WHO 2008 . . .245
6. Malattie del sistema monocito-macrofagico 247
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo, G.
Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Granuloma da corpo estraneo . . . . . . . . . . . . . . .247
Da processi infettivi e parassitari . . . . . . . . . . . .247
Sindromi emofagocitiche . . . . . . . . . . . . . . . . . .247
Malattia di Rosai-Dorfman . . . . . . . . . . . . . . . . .247
Tesaurismosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248
Malattia di Gaucher . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .248
Malattia di Niemann-Pick . . . . . . . . . . . . . . . .249
Istiocitosi blu mare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .249
Sarcoma istiocitico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .250
Istiocitosi a cellule di Langerhans (Istiocitosi X) .250
7. Disordini reattivi della filiera linfoide
(linfoadenopatie reattive) . . . . . . . . . . . . . .251
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Mononucleosi e sindromi mononucleosiche . . .251
XIV INDICE GENERALE Vol. V/1
Vol. V/1 XV
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .251
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251
Sarcoidosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252
Diagnosi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .252
8. Disordini neoplastici linfoproliferativi . . . .253
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Introduzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .253
Disordini ematologici linfoproliferativi cronici
ad interessamento periferico . . . . . . . . . . . . . . . .254
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .254
Leucemia linfatica cronica a cellule B (LLC) . .255
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255
Stadiazione della LLC . . . . . . . . . . . . . . . . . .255
Stadiazione di Rai . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255
Stadiazione di Binet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .255
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .256
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .256
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .256
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .258
Citogenetica e biologia molecolare . . . . . . . .258
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .259
Evoluzione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .259
Leucemia prolinfocitica a cellule B (LPL-B) . .260
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .260
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Hairy cell leukemia (HCL) . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .262
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .263
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .263
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .263
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264
Variante di Cawley (tipo II) . . . . . . . . . . . . . .265
Variante di Katayama . . . . . . . . . . . . . . . . . . .265
9. Gammapatie monoclonali . . . . . . . . . . . . . .266
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Mieloma multiplo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .266
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .266
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .268
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .270
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .271
Istologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .271
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .271
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .278
Leucemia plasmacellulare . . . . . . . . . . . . . . . . .279
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .279
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .279
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .280
Macroglobulinemia di Waldenström (MW) . . . .280
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .280
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .280
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281
Test di laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .281
Diagnosi differenziale . . . . . . . . . . . . . . . . . . .282
10. Linfomi non Hodgkin a possibile componente
leucemica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .283
G.L. Castoldi, V. Liso, L. Cavazzini, A. Cuneo,
G. Specchia, P. Tomasi, G.M. Rigolin
Linfoma follicolare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .285
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286
Linfoma mantellare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .286
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .288
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .288
Istopatologia linfonodi . . . . . . . . . . . . . . . . . .289
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .289
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .289
Linfoma diffuso a grandi cellule B . . . . . . . . . .291
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291
Linfoma anaplastico CD30+ a grandi cellule
(T o null) sistemico primitivo . . . . . . . . . . . . . .291
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291
Immunofenotipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291
Linfoma di Burkitt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293
Istopatologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293
Citogenetica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293
Linfoma splenico della zona marginale . . . . . . .293
Definizione . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .293
Sangue periferico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296
Midollo osseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296
Citochimica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296
Microscopia elettronica . . . . . . . . . . . . . . . . .296
Immunologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .296
Citogenetica e indagini molecolari . . . . . . . . .298
11. Linfoma di Hodgkin (LH) . . . . . . . . . . . .<

  • Anno 2011
  • Autore Cuneo,Castoldi,Rigolin
  • codice isbn 9788829920549
  • Edizione Piccin
  • Pagine 450

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